表達HBV病毒的人肝細胞（HepG2.2.15）介紹：乙型肝炎病毒（HBV）是一種引起急性和慢性壞死炎癥性肝病及肝細胞癌的DNA病毒。HBV 具有特異嗜肝性、非細胞損傷與裂解、易發(fā)展為慢性等特征。表達HBV病毒的人肝細胞（HepG2.2.15）是能夠表達HBV 抗原和分泌完整HBV 顆粒的肝胚瘤細胞系，也是目前用來研究HBV復制．肝細胞對干擾素（IFN）應答最為合適的細胞。
1） 來源：肝
2） 形態(tài)：上皮細胞樣
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優(yōu)質胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
表達HBV病毒的人肝細胞（HepG2.2.15）用途：僅供科研使用。
表達HBV病毒的人肝細胞（HepG2.2.15）培養(yǎng)步驟：
一．表達HBV病毒的人肝細胞（HepG2.2.15）培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備DMEM-H 培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO31.5g/L,2mM L-谷氨酰胺，500μg/ml G418)，95%；優(yōu)質胎牛血清，5%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml 含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO 后進行凍存。
注意事項：
1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
