人肝細胞(QSG-7701)介紹：人肝細胞(QSG-7701)系來自35 歲女性的肝癌癌旁組織。

人肝細胞(QSG-7701)特性：

1） 來源：肝臟

2） 形態(tài)：上皮細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

人肝細胞(QSG-7701)用途：僅供科研使用。

人肝細胞(QSG-7701)培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640 培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091)，90%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL 細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL 培養(yǎng)基的15ml 離心管中混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml 培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤洗細胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml 此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕吹打后吸出，移入15ml 離心管中，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，加入1mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml 培養(yǎng)基的T-25 培養(yǎng)瓶中或含有14ml 培養(yǎng)基的T-75 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3 步驟進行，最后的重懸液使用血清。加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻，按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106 個細胞凍存。

注意事項：

1. 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。