小鼠白血病細(xì)胞(P388)特性:

1） 來源：小鼠

2） 形態(tài)：圓形，懸浮生長

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

小鼠白血病細(xì)胞(P388)用途：僅供科研使用。

小鼠白血病細(xì)胞(P388)培養(yǎng)步驟:

一．小鼠白血病細(xì)胞(P388)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L,D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉0.11g/L)，90%；馬血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span>細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5 分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO 搖勻后進(jìn)行凍存。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。