NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）基本信息：
NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。NK-92MI是轉染得到的源自NK-92的IL-2非依賴的NK細胞株，親本細胞通過微粒體基因轉化法用逆轉錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進行轉化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉化是穩定的。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）有以下特征：CD2,CD7,CD11a,CD28,CD45,CD54表面標記陽性，
1）來源：50 years
2）形態：淋巴母細胞
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存
可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式
（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；
（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
（3）收到細胞后請拍照，3天內如果發現污染，請及時拍照與我們聯系。
NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞））用途：僅供科研使用。
細胞接收后的處理：
1） 收到細胞后，請檢查發貨培養瓶的狀況，若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯系我們。
2） 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時，最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進行，能準確判斷細胞的傳代密度?？醇毎男螒B請在10X和20×物鏡下，同時給剛收到的細胞拍照，（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存，作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態的依據。
3） 觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4） 貼壁細胞：在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象，如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長，可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基的原培養瓶中（或新的培養瓶中）。
5） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中（加入按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基）。
6）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代 。
NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養步驟
一．NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養基及培養凍存條件準備：
1）MEMα+0.2mM Inositol+0.1mM β-mercaptoethanol+0.02mM Folic Acid+100-200U/ml recombinant IL-2+12.5% HS+12.5% FBS+1% P/S
2）培養條件：Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%，Temperature: 37℃。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。
4）Medium Renewal：every 2 to 3 days
5）Antigen Expression：CD2＋, CD7＋, CD11a＋, CD28＋, CD45＋, CD54＋, CD56＋, CD1 -,
6）Applications：transfection and can be used effectively for immunological ex vivo purging
一． NK-92（人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞）培養注意事項：
1. NK-92和NK-92MI細胞均為懸浮生長，大部分細胞聚集成團，少數分散的細胞，并且細胞間隙會有較多的死細胞和細胞碎片；
2. NK-92和NK-92MI細胞對營養需求很高，建議使用進口胎牛血清和馬血清培養，白介2的質量對NK-92的生長影響很大，正常培養時換液周期為2天，建議使用半量換液和離心換液交替進行，即半量換液1-2次后離心全量換液一次，盡量減少離心次數；
3. 細胞生長時聚集的細胞團會逐漸增大，正常的細胞團顯微鏡下為白色透亮的，若細胞聚集太多，出現細胞團中部發暗時可在換液后將細胞團輕輕搖散，或者用移液器輕輕吹散，吹打力度不可過大，否則會出現大量死細胞和細胞碎片。這個細胞沒有聚團的活性很低。細胞對營養要求也很高，千萬不能團塊太大營養不足，不然48小時細胞就會死亡。這個細胞計數是不準確的 因為細胞成團長，團塊不可能吹散計數，還有就是散落的細胞細胞活性不好，所以細胞檢測活性也是不準確的。
4. 運輸條件可能會對細胞造成一定的影響，收到細胞后請按以下方法處理：
a) 收到細胞后靜置，顯微鏡下觀察細胞并拍照，主要找聚集的細胞團；
b) 將培養瓶豎置，靜置4~6h，肉眼觀察大部分細胞團都沉到底部后，將多余的培養基輕輕倒入50ml離心管中離心收集一部分細胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右時可換用移液器吸取上清，保證大部分細胞團留在瓶中），補加3~4ml新鮮培養基進行培養，若細胞量較多可分兩瓶，離心收集的細胞也可單獨接種培養；
c) 細胞對機械損傷特別敏感，所以最好是不要離心
5. 細胞復蘇時不能離心處理，提前準備一個離心管，加10ml培養基，把溶解后的凍存細胞接入，靜置2小時左右，細胞都沉降在底部，去上清，用完全培養基接到T25培養瓶內進行培養
二．細胞處理：
1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物（mingzhoubio）按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
培養細胞請注意
(1)傳代時細胞的接種密度應控制在 1萬-4萬 活細胞/平方厘米。
(2)選用高質量的胎牛血清配制培養液。
