來源于中山醫(yī)院， 用人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H 接種裸鼠， 進(jìn)行3 次肺轉(zhuǎn)移篩選， 取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮下接種后高度自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞系

細(xì)胞特性

12）   1）來源： 肝癌

2）形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣

3）含量：＞ 1 x106 個／ml

4）污染： 支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測為陰性

S）    規(guī)格： T25 瓶或者 1ml  凍存管包裝

運(yùn)輸和保存： 可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸， 收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇：（2）存活細(xì)

胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

細(xì)胞用途： 僅供科研使用。細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備 DM EM 培養(yǎng)基｛DM EM / F-1 2, GIBCO，貨號12400024 ，添加NaHC0 3 2.0g/L),

85%： 馬血清， 10 %； 胎牛血清， 5%。

2）培養(yǎng)條件 ： 氣相： 空氣， 95%； 二氧化碳， 5%。 溫度： 37 攝氏度， 培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。

3）凍存液： 90%完全培養(yǎng)基， 10 %DM SO， 現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1                          復(fù)蘇細(xì)胞： 將含有1ml   細(xì)胞懸液的凍存管在37 °C 水浴中迅速搖晃解凍， 加 入 4ml  培養(yǎng)基混合均勻。在1000 RPM  條件下離心4 分鐘， 棄去上清液， 補(bǔ)  加 1-2ml    培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（ 或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 10cm  皿中， 加入約8ml  培養(yǎng)基， 培養(yǎng)過夜〉。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）   細(xì)胞傳代： 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%， 即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1.    棄去培養(yǎng)上清， 用不含鈣、鎮(zhèn)離子的PBS  潤洗細(xì)胞1-2   次。

2.    加 2m l 消化液（0.25%Trypsin-0. 53m M EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘， 然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況， 若細(xì)胞大部分變圓并脫落， 迅速拿回操作臺， 輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。